Aquaporin 2/AQP2 Double Nickase Plasmid (h): sc-400402-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das Aquaporin 2/AQP2 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- Aquaporin 2/AQP2 Double-Nickase-Plasmid (h) und Aquaporin 2/AQP2 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf AQP2 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: Aquaporin 2/AQP2: sc-47710
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Aquaporin 2/AQP2 Double Nickase Plasmid (h) | sc-400402-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Aquaporin 2/AQP2 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-400402-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
AQP2 kodiert Aquaporin‑2, einen durch Vasopressin regulierten Wasserkanal, der die transzelluläre Wasserresorption in den Hauptzellen der Sammelrohre der Niere vermittelt. Sein Transport zur apikalen Membran wird durch eine AVPR2‑gesteuerte cAMP/PKA‑Signalgebung und durch phosphorylierungsabhängige Einlagerung in bzw. Rückholung aus Vesikeln kontrolliert, wodurch AQP2 mit epithelialer Polarität und osmotischer Homöostase verknüpft ist. Veränderungen der AQP2‑Expression, -Lokalisation oder Kanalfunktion sind mit einer verminderten Harnkonzentrierungsfähigkeit assoziiert und tragen zu Störungen des Wasserhaushalts wie dem nephrogenen Diabetes insipidus und hyponatriämischen Zuständen bei. Als in der Niere angereichertes Membranprotein wird AQP2 außerdem genutzt, um endosomales Recycling, die Qualitätskontrolle von Membranproteinen und hormonregulierte Transportwege zu untersuchen.
Aquaporin 2/AQP2 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des AQP2-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von AQP2 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die AQP2-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit AQP2-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.