apoL1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403137-ACT

APOL1 codifica a apolipoproteína L1 (apoL1), uma proteína ligante de lipídios implicada na defesa imune inata e em respostas ao estresse celular. A apoL1 está associada a membranas endossomais e autofágicas e tem sido relacionada à regulação do tráfego vesicular, de vias de morte celular programada e de redes de sinalização induzíveis por interferon. Em tipos celulares relevantes para o rim, a expressão de APOL1 e a atividade dependente de variantes têm sido estudadas no contexto da homeostase de podócitos, da disfunção mitocondrial e da sinalização inflamatória. A biologia desregulada de APOL1 é amplamente investigada por sua contribuição para mecanismos subjacentes a fenótipos renais proteinúricos e a modelos de lesão mediada pelo sistema imune.

apoL1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de APOL1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

apoL1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus APOL1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição APOL1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de apoL1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus APOL1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de apoL1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via apoL1 em células tumorais com expressão de APOL1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.