Plasmide CRISPR d'Activation (h) ApoER2: sc-403253-ACT

LRP8 code le récepteur 2 de l’apolipoprotéine E (ApoER2), un membre de la famille des récepteurs des LDL qui assure l’endocytose et la transduction du signal dans les neurones et les cellules vasculaires. ApoER2 agit comme récepteur de la Reelin et des lipoprotéines contenant ApoE, et soutient la migration neuronale, la plasticité synaptique et le remodelage du cytosquelette via une signalisation en aval dépendante de Dab1 ainsi que des interactions avec les voies PI3K/AKT et des kinases de la famille Src. Dans le système nerveux central, LRP8 influence le trafic des récepteurs glutamatergiques et la potentialisation à long terme, reliant sa régulation à des mécanismes d’apprentissage et de mémoire. Une signalisation ApoER2 dérégulée et un déséquilibre des isoformes ont été associés à des phénotypes neurodéveloppementaux et neurodégénératifs, et LRP8 est également étudié pour son rôle dans la gestion des lipides et la biologie plaquettaire, en lien avec la pathologie vasculaire.

ApoER2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de LRP8 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

ApoER2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus LRP8 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription LRP8, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de ApoER2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus LRP8 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de ApoER2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie ApoER2 dans les cellules tumorales présentant une expression de LRP8 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.