Plasmide Double Nickase (m) apoC-III: sc-419165-NIC
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (m) apoC-III correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide apoC-III Double Nickase (m) et le plasmide apoC-III Double Nickase (m2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant Apoc3. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
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Plasmide Double Nickase (m) apoC-III | sc-419165-NIC | 20 µg | $410.00 |
Le gène murin *Apoc3* code l’apolipoprotéine C‑III (apoC‑III), une apolipoprotéine sécrétée qui s’associe aux lipoprotéines riches en triglycérides et module la gestion des lipides plasmatiques. L’apoC‑III influence l’hydrolyse des triglycérides dépendante de la lipoprotéine lipase ainsi que la clairance hépatique des particules résiduelles, ce qui l’implique dans le transport des lipides, le métabolisme énergétique et la régulation endocrine des réponses au jeûne et à l’alimentation. Une expression altérée de *Apoc3* perturbe l’homéostasie systémique des triglycérides et est souvent étudiée dans le contexte de phénotypes métaboliques associés aux dyslipidémies, notamment la résistance à l’insuline et les processus liés à la stéatose hépatique. Chez la souris, *Apoc3* est également utilisé comme locus modèle pour étudier les voies de sécrétion des hépatocytes, le remodelage des lipoprotéines et les interactions gène–régime alimentaire.
apoC-III Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Apoc3 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Apoc3. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Apoc3. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Apoc3.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.