Plásmido Doble Nickase (h) APOBEC3B: sc-401700-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)APOBEC3B consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa APOBEC3B (h) y el plásmido de doble nickasa APOBEC3B (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a APOBEC3B. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) APOBEC3B | sc-401700-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) APOBEC3B | sc-401700-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
APOBEC3B (subunidad catalítica 3B de la enzima de edición del ARNm de apolipoproteína B) es una desaminasa de citidina que actúa sobre ADN monocatenario y convierte citosina en uracilo durante la replicación y la reparación del ADN, generando firmas mutacionales características C→T/G. Participa en la defensa antiviral intrínseca y se interrelaciona con las respuestas al estrés replicativo, la señalización del daño en el ADN y procesos de reparación mutagénica que determinan la estabilidad del genoma. La actividad desregulada de APOBEC3B se ha asociado con un aumento de la carga de mutaciones somáticas y con la evolución tumoral en múltiples tipos de cáncer, lo que la convierte en un factor clave en estudios de mutagénesis, diversificación clonal y vías de mantenimiento del genoma. Habitualmente, los investigadores estudian APOBEC3B en el contexto de la inmunidad innata regulada por interferón, el metabolismo de los ácidos nucleicos y los mecanismos que acoplan la exposición de ADN monocatenario asociada a la replicación con la actividad de edición.
APOBEC3B El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus APOBEC3B en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de APOBEC3B. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de APOBEC3B. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con APOBEC3B alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.