apoB Double Nickaseプラスミド (h): sc-400705-NIC
- 対象生物種: human
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- apoB Double Nickaseプラスミド (h)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- apoBダブルニカースプラスミド（h）およびapoBダブルニカースプラスミド（h2）は、APOBを標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
- トランスフェクションの後、遺伝子ノックアウト効果は、抗体を用いたWB、IFまたはIHCによって検定されることができます: apoB 抗体 (A-6): sc-393636
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
apoB Double Nickaseプラスミド (h) | sc-400705-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
apoB Double Nickaseプラスミド (h2) | sc-400705-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
APOBはアポリポタンパク質B（apoB）をコードしており、apoBは動脈硬化惹起性リポタンパク質の必須の構造要素である。apoBは肝細胞における超低比重リポタンパク質（VLDL）の組み立ての足場となり、循環に向けてapoB-100へとプロセシングされる。apoBは、ミクロソームトリグリセリド転送タンパク質（MTP）や小胞体の分泌プログラムに関わる経路を介して、中性脂肪およびコレステロールに富む粒子の脂質付加（リピデーション）と分泌を調整する。末梢組織では、apoB含有リポタンパク質がLDL受容体依存的取り込みの中心的役割を担い、脂質輸送を細胞内コレステロール恒常性および下流シグナル伝達と結び付けている。APOBの発現やapoB粒子産生の破綻は脂質異常症や脂質駆動性の血管病変と関連しており、リポタンパク質代謝の機構研究における中核的な標的となっている。
apoB ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における APOB 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、APOB内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、APOBの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、APOBが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。