APNG Plasmide Double Nickase (h): sc-404850-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- APNG Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il APNG Double Nickase Plasmid (h) e il APNG Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira MPG. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: APNG Antibody (D-2): sc-390684
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
APNG Plasmide Double Nickase (h) | sc-404850-NIC | 20 µg | $410.00 |
Il gene umano **MPG** codifica la **DNA glicosilasi N-metilpurinica** (APNG/AAG), un enzima chiave di innesco della via di riparazione per escissione di basi (BER) che riconosce ed elimina lesioni delle purine alchilate e deaminate, come la **3-metiladenina** e l’**ipoxantina**. Generando siti abasici che vengono poi ulteriormente processati da endonucleasi AP, polimerasi e ligasi, APNG contribuisce a mantenere la stabilità del genoma durante la replicazione e in risposta a danni al DNA di origine endogena e ambientale. L’attività di MPG si intreccia con le risposte cellulari allo stress ossidativo e allo stress replicativo, influenzando l’accumulo di mutazioni e l’integrità cromosomica. Una capacità BER deregolata, inclusa un’alterazione della funzione o dell’espressione di APNG, è stata collegata a fenotipi di instabilità genomica osservati in diversi contesti associati a malattie, rendendo MPG un bersaglio utile per studi meccanicistici sulla riparazione del DNA.
APNG Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus MPG nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di MPG. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di MPG. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con MPG interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.