APLNR CRISPR Activation Plasmid (h): sc-402374-ACT

APLNR kodiert den Apelin-Rezeptor (auch als APJ bekannt), einen G‑Protein‑gekoppelten Rezeptor der Klasse A, der durch die Peptidliganden Apelin und ELA/Toddler aktiviert wird. Die APLNR-Signalübertragung reguliert die Gefäßentwicklung und die Endothelfunktion und bindet nachgeschaltet Signalwege wie PI3K–AKT, ERK/MAPK, Kalziummobilisierung und die Bildung von Stickstoffmonoxid ein, die angiogene, metabolische und kontraktile Programme prägen. Neben Funktionen in der kardiovaskulären und der Flüssigkeitshomöostase wurde APLNR-Aktivität in verschiedenen Gewebekontexten auch mit der Modulation von Zellmigration und inflammatorischer Signalgebung in Verbindung gebracht. Eine fehlregulierte Signalübertragung der APLNR–Apelin-Achse ist mit kardiometabolischen Phänotypen assoziiert und wurde im Zusammenhang mit vaskulärem Remodeling und der Biologie des Tumormikromilieus untersucht, was ihre Relevanz für mechanistische Studien unterstreicht.

APLNR Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen APLNR-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

APLNR Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des APLNR-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der APLNR-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen APLNR-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native APLNR-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von APLNR-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des APLNR-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem APLNR-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.