Plasmide CRISPR d'Activation (h) APC1: sc-405103-ACT

Le gène humain **ANAPC1** code **APC1**, une sous-unité d’échafaudage centrale du complexe promoteur de l’anaphase/cyclosome (**APC/C**), une ligase E3 à ubiquitine essentielle qui coordonne une protéolyse ordonnée pendant la mitose et la phase G1. Via les interactions de l’APC/C avec des coactivateurs tels que **CDC20** et **CDH1**, APC1 soutient l’ubiquitinylation et la dégradation de régulateurs clés du cycle cellulaire, assurant ainsi le contrôle du point de contrôle du fuseau, la sortie de mitose et la stabilité du génome. La dérégulation de l’activité de l’APC/C et des voies ubiquitine–protéasome associées est liée à l’instabilité chromosomique et à une altération de la signalisation proliférative, faisant d’ANAPC1 un nœud pertinent pour l’étude du contrôle du cycle cellulaire et des phénotypes associés au cancer.

APC1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de ANAPC1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

APC1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus ANAPC1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription ANAPC1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de APC1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus ANAPC1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de APC1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie APC1 dans les cellules tumorales présentant une expression de ANAPC1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.