Plasmide CRISPR/Cas9 KO AP1GBP1 (h): sc-411596

Présentation

SYNRG code pour AP1GBP1 (synergine gamma), une protéine associée aux adaptateurs impliquée dans le trafic médié par la clathrine et le tri des cargos entre le réseau trans-golgien et les compartiments endosomaux. AP1GBP1 interagit avec le complexe adaptateur AP-1 et contribue à l’assemblage du manteau vésiculaire, à la courbure membranaire et à la régulation spatiale des signaux de tri qui contrôlent la localisation des protéines. Par ces fonctions, SYNRG contribue à l’homéostasie des voies sécrétoire et endocytique, en influençant le recyclage des récepteurs, l’adressage vers les lysosomes et l’identité des compartiments. Un trafic intracellulaire dérégulé est une caractéristique récurrente des processus neurodéveloppementaux et neurodégénératifs, ainsi que de la reprogrammation de la signalisation oncogénique, ce qui fait de SYNRG un nœud utile pour des études mécanistiques du transport des protéines dépendant des voies.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO AP1GBP1 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène SYNRG dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du SYNRG, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert SYNRG à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine AP1GBP1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en SYNRG pour l'étude de la signalisation de AP1GBP1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de SYNRG essentiels à la fonction de AP1GBP1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de SYNRG pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le AP1GBP1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le AP1GBP1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus SYNRG. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le AP1GBP1 plasmide HDR (h) et le AP1GBP1 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie SYNRG pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles SYNRG définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.