Plásmido Doble Nickase (h) AP-2μ1: sc-403095-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)AP-2μ1 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa AP-2μ1 (h) y el plásmido de doble nickasa AP-2μ1 (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a AP2M1. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: AP-2μ1 Anticuerpo (D-7): sc-515920
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) AP-2μ1 | sc-403095-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) AP-2μ1 | sc-403095-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
AP2M1 codifica la subunidad µ1 del complejo adaptador de proteínas 2 (AP-2), un componente central de la endocitosis mediada por clatrina en la membrana plasmática. AP-2µ1 reconoce motivos de clasificación de carga y coordina el ensamblaje del recubrimiento de clatrina para regular la internalización y el reciclaje de receptores, transportadores y otras proteínas de membrana. Mediante el control del tráfico vesicular, AP2M1 influye en la atenuación de la señalización, la captación de nutrientes y la dinámica de las vesículas sinápticas, vinculándose a rutas como el tráfico de receptores tirosina cinasa y de GPCR. La desregulación de la función de adaptadores endocíticos se ha asociado con alteraciones de la homeostasis neuronal y metabólica, y es con frecuencia relevante en estudios de señalización en células cancerosas, fenotipos del neurodesarrollo y recambio de proteínas de membrana.
AP-2μ1 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus AP2M1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de AP2M1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de AP2M1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con AP2M1 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.