AP-2γ CRISPR Activation Plasmid (h): sc-400884-ACT

TFAP2C kodiert den humanen Transkriptionsfaktor AP-2γ (TFAP2C), ein sequenzspezifisch DNA-bindendes Protein, das Genexpressionsprogramme reguliert, welche die epitheliale Differenzierung, Proliferation und Linienfestlegung steuern. AP-2γ integriert Signale aus Entwicklungs- und hormonresponsiven Signalwegen und moduliert Transkriptionsnetzwerke, die an Zellzyklusprogression, Apoptose und der Regulation von Chromatinzuständen beteiligt sind. Eine fehlregulierte TFAP2C-Aktivität wurde in verschiedenen Krebskontexten mit veränderter epithelialer Identität, erhöhter Invasivität und transcriptioneller Reprogrammierung in Verbindung gebracht, was TFAP2C zu einem nützlichen Knotenpunkt für die Untersuchung onkogener Transkriptionsschaltkreise macht. Darüber hinaus trägt TFAP2C zur Biologie der Plazenta sowie des Mammarepithels bei und bietet damit einen Rahmen, um gewebespezifische Enhancer-Nutzung und die Kooperativität von Transkriptionsfaktoren zu untersuchen.

AP-2γ Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen TFAP2C-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

AP-2γ Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des TFAP2C-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der TFAP2C-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen AP-2γ-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native TFAP2C-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von AP-2γ-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des AP-2γ-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem TFAP2C-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.