Antiquitin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-417902

Übersicht

ALDH7A1 kodiert Antiquitin, eine NAD+-abhängige Aldehyddehydrogenase, die am Lysinabbau beteiligt ist, indem sie α‑Aminoadipinsäure‑Semialdehyd und verwandte reaktive Aldehyde oxidiert. Durch die Entgiftung von Aldehyd‑Zwischenprodukten trägt Antiquitin zur zellulären Redoxhomöostase bei und begrenzt die Anreicherung elektrophiler Metaboliten, die Stoffwechsel- und Stressantwort‑Signalwege stören können. Loss‑of‑function‑Varianten sind mit pyridoxinabhängiger Epilepsie assoziiert, was die Störung des Lysinabbaus und sekundäre Effekte auf die Verfügbarkeit von Vitamin B6/PLP sowie den Neurotransmitterstoffwechsel widerspiegelt. ALDH7A1 ist daher ein nützliches Ziel zur Untersuchung der mitochondrial‑zytosolischen metabolischen Kopplung, der Aldehyd‑Stressbiologie und angeborener Stoffwechselstörungen in humanen Zellmodellen.

Das Antiquitin CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des ALDH7A1-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des ALDH7A1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von ALDH7A1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Antiquitin-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von ALDH7A1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Antiquitin-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf ALDH7A1-Exone abzielen, die für die Antiquitin-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere ALDH7A1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Antiquitin CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom Antiquitin CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des ALDH7A1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Antiquitin HDR-Plasmid (h) und Antiquitin HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von ALDH7A1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten ALDH7A1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.