ANT2 Double Nickase Plasmid (m): sc-419113-NIC
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das ANT2 Double Nickase Plasmid (m) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- ANT2 Double-Nickase-Plasmid (m) und ANT2 Double-Nickase-Plasmid (m2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf Slc25a5 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
ANT2 Double Nickase Plasmid (m) | sc-419113-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
ANT2 Double Nickase Plasmid (m2) | sc-419113-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Slc25a5 kodiert die mitochondriale ADP/ATP-Translokase ANT2, einen zentralen Carrier der inneren Membran, der zytosolisches ADP gegen ATP aus der Matrix austauscht und so die oxidative Phosphorylierung sowie die zelluläre Energiebilanz aufrechterhält. Die ANT2-Aktivität koppelt den Adeninnukleotid-Pool an das mitochondriale Membranpotenzial und verknüpft damit den Stofffluss mit Prozessen wie der mitochondrialen Biogenese, der Anfälligkeit für Apoptose und der Homöostase reaktiver Sauerstoffspezies. In Mausmodellen wird ANT2 häufig im Zusammenhang mit metabolischer Umprogrammierung, proliferationsbedingt erhöhtem Energiebedarf und mitochondrialen Stressantworten untersucht. Eine Fehlregulation des Adeninnukleotid-Transports und der mitochondrialen Bioenergetik ist relevant für neuromuskuläre und kardiometabolische Phänotypen sowie für allgemeinere Modelle mitochondrialer Dysfunktion.
ANT2 Das Double-Nickase-Plasmid (m) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des Slc25a5-Lokus in mouse-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von Slc25a5 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die Slc25a5-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit Slc25a5-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.