ANO1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2): sc-401314-KO-2
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- ANO1 Das CRISPR/Cas9-Knockout (KO)-Plasmid (h2) ist ein Pool von Plasmiden, von denen jedes für die Cas9-Nuklease und eine zielspezifische 20-nt-Guide-RNA (gRNA) kodiert, die für maximale Knockout-Effizienz unter Verwendung von Sequenzen aus der GeCKO v2-Bibliothek entwickelt wurde
- gRNA-Sequenzen lenken Cas9 so, dass es ortsspezifische Doppelstrangbrüche (DSBs) im ANO1-Genomlokus induziert, was zu einem Gen-Knockout durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ) führt
- Die Puromycin-Resistenz- und RFP-Gene werden von LoxP-Stellen flankiert, was die Entfernung der Selektionsmarker mittels Cre-Rekombinase (Cre-Vektor: sc-418923) nach der Etablierung stabiler Knockout-Zelllinien ermöglicht
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: ANO1: sc-377115
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
ANO1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) | sc-401314-KO-2 | 20 µg | $397.00 |
Übersicht
ANO1 (TMEM16A) kodiert einen Ca2+-aktivierten Chloridkanal, der den epithelialen Ionentransport und Flüssigkeitstransport, die Erregbarkeit glatter Muskulatur sowie die sensorische Signaltransduktion reguliert. Die Kanalaktivität koppelt intrazelluläre Ca2+-Signale an Membrandepolarisation und Chloridfluss und prägt damit Prozesse wie die Sekretion in den Atemwegen und im Gastrointestinaltrakt sowie die Modulation der neuronalen Feuerrate. ANO1 ist Teil von Signalnetzwerken stromabwärts einer rezeptorvermittelten Aktivierung der Phospholipase C und der Ca2+-Freisetzung und beeinflusst in verschiedenen Gewebekontexten die Zellmotilität und Membrandynamik. Eine dysregulierte ANO1-Expression oder -Aktivität wurde mit veränderter Erregbarkeit und Sekretionsphänotypen in Verbindung gebracht und wird in der Onkologie und bei Entzündungen häufig als Beitrag zu aberranten Programmen der Zellproliferation und Migration untersucht.
Das ANO1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des ANO1-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des ANO1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.
Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von ANO1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die ANO1-Proteinexpression aufheben.
Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von ANO1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der ANO1-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.
Hauptmerkmale
- sgRNAs, die auf ANO1-Exone abzielen, die für die ANO1-Funktion entscheidend sind
Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
Pool von Plasmiden, die auf mehrere ANO1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion
Designvarianten
CRISPRs +/- HDRs
- gRNAs, die vom ANO1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom ANO1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des ANO1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das ANO1 HDR-Plasmid (h) und ANO1 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von ANO1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten ANO1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.