Plasmide CRISPR d'Activation (h) Annexin IV: sc-402134-ACT

L’ANXA4 humain code l’annexine IV, une protéine de liaison aux phospholipides dépendante du Ca2+ qui s’associe aux membranes cellulaires pour réguler le trafic membranaire, l’activité des canaux ioniques et l’organisation du cytosquelette cortical. L’annexine IV participe à des processus liés à la signalisation calcique, notamment la fusion des vésicules, la polarisation épithéliale et le maintien de l’intégrité membranaire lors des réponses au stress. Une expression altérée d’ANXA4 a été rapportée dans de nombreux contextes pathologiques, en particulier dans les tumeurs d’origine épithéliale, où elle est étudiée en lien avec l’invasion, la résistance à l’apoptose et le remodelage des jonctions cellule–cellule. Ces caractéristiques font de l’annexine IV un élément d’intérêt pour l’étude des réseaux de signalisation associés aux membranes et des dynamiques régulées par le calcium dans les cellules humaines.

Annexin IV Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de ANXA4 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Annexin IV Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus ANXA4 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription ANXA4, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Annexin IV. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus ANXA4 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Annexin IV au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Annexin IV dans les cellules tumorales présentant une expression de ANXA4 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.