Plasmide CRISPR d'Activation (h) Annexin III: sc-403572-ACT

L’ANXA3 humain code l’annexine III, une protéine de liaison aux phospholipides dépendante du calcium, qui s’associe aux membranes cellulaires et contribue à l’organisation membranaire, au trafic vésiculaire et à la dynamique du cytosquelette. L’annexine III a été impliquée dans la régulation de la signalisation inflammatoire et des fonctions des cellules de l’immunité innée, notamment dans des processus liés à la biologie des granules et au remodelage des membranes. Une expression altérée d’ANXA3 est fréquemment rapportée dans des études en oncologie et centrées sur l’inflammation, où elle est corrélée à des modifications de la prolifération cellulaire, de la migration et des réponses au stress. Ces caractéristiques font d’ANXA3 un nœud utile pour étudier la signalisation à proximité de la membrane et les voies régulatrices dépendantes des lipides.

Annexin III Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de ANXA3 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Annexin III Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus ANXA3 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription ANXA3, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Annexin III. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus ANXA3 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Annexin III au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Annexin III dans les cellules tumorales présentant une expression de ANXA3 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.