Annexin I CRISPR Activation Plasmid (h): sc-401024-ACT

Humanes **ANXA1** kodiert **Annexin I**, ein Ca²⁺-abhängiges, phospholipidbindendes Protein, das mit Zellmembranen assoziiert und so den vesikulären Transport, die Umgestaltung des Zytoskeletts sowie die Reparatur von Membranen reguliert. Annexin I ist ein wichtiger Vermittler der Auflösung von Entzündungen und der angeborenen Immunantwort; es beeinflusst die Aktivität der Phospholipase A2 und die Eikosanoidproduktion und moduliert die Leukozytenmigration sowie die Efferzytose. Zudem ist es mit Signalwegen verknüpft, die Zellproliferation, Apoptose und epitheliale–mesenchymale Dynamiken steuern, und übernimmt kontextabhängige Rollen in Stressantworten. Eine fehlregulierte ANXA1-Expression wurde bei entzündlichen Erkrankungen und in mehreren Krebsarten beschrieben, wo ANXA1 als Regulator von Signalen im Tumormikromilieu und metastatischen Phänotypen untersucht wird.

Annexin I Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen ANXA1-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Annexin I Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des ANXA1-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der ANXA1-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Annexin I-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native ANXA1-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Annexin I-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Annexin I-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem ANXA1-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.