Plasmide CRISPR d'Activation (h) Annexin I: sc-401024-ACT

L’ANXA1 humain code l’annexine I, une protéine de liaison aux phospholipides dépendante du Ca²⁺, qui s’associe aux membranes cellulaires pour réguler le trafic vésiculaire, le remodelage du cytosquelette et la réparation membranaire. L’annexine I est un médiateur important de la résolution de l’inflammation et de la signalisation de l’immunité innée ; elle influence l’activité de la phospholipase A2 et la production d’eicosanoïdes, et module la migration des leucocytes ainsi que l’efférocytose. Elle est également liée à des voies contrôlant la prolifération cellulaire, l’apoptose et la dynamique épithélio-mésenchymateuse, avec des rôles dépendants du contexte dans les réponses au stress. Une expression dérégulée d’ANXA1 a été rapportée dans des troubles inflammatoires et dans de nombreux types de cancers, où elle est étudiée comme régulateur de la signalisation du microenvironnement tumoral et des phénotypes métastatiques.

Annexin I Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de ANXA1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Annexin I Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus ANXA1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription ANXA1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Annexin I. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus ANXA1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Annexin I au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Annexin I dans les cellules tumorales présentant une expression de ANXA1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.