Ankyrin G Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-400421-NIC
- alvos específicos: human
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- Ankyrin GO plasmídeo de dupla Nickase (h) consiste num par de plasmídeos cada um contem D10A com mutação na nuclease Cas9 nuclease e um alvo especifico de RNA guia com 20 na (gRNA), criado para nocautear a expressão genética com maior especificidade do que o seu correspondente CRISPR/Cas9 KO
- Sequencias pareadas de gRNA são de aproximadamente 20 bp para permitir que os cortes duplos no DNA genômico mediados pela Casp ocorram com especificidade , o que se assemelha ao corte pela DSB
- Cada plasmídeo pertencente ao par de plasmídeos contem um gene de resistência a puromicina para seleção; o outro plasmídeo do par contem um marcador de GFP para a visualização e confirmação da transfecção
- O Plasmídeo Double Nickase Ankyrin G (h) e o Plasmídeo Double Nickase Ankyrin G (h2) codificam designs distintos de pares de gRNA direcionados para ANK3. Um ou ambos os desenhos podem estar disponíveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:Ankyrin G Anticorpo (463): sc-12719
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
Ankyrin G Plasmídeo duplo de Nickase (h) | sc-400421-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Ankyrin G Plasmídeo duplo de Nickase (h2) | sc-400421-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ANK3 codifica a anquirina G, uma proteína adaptadora de membrana que conecta diversos canais iônicos e moléculas de adesão celular ao citoesqueleto de espectrina–actina, organizando domínios especializados da membrana, como o segmento inicial do axônio e os nódulos de Ranvier. Ao regular o agrupamento de canais e a formação de andaimes (scaffolding) em membranas excitáveis, a anquirina G influencia a polaridade neuronal, a iniciação do potencial de ação e a estabilidade sináptica, além de também contribuir para a integridade das junções célula–célula em epitélios. Alterações associadas a ANK3 têm sido relacionadas à genética de doenças neuropsiquiátricas e a mudanças na função de redes neuronais, sustentando seu uso como um nó mecanístico em estudos de excitabilidade, desenvolvimento de circuitos e organização do citoesqueleto. Essas propriedades tornam ANK3 um alvo relevante para dissecar vias que governam o tráfego de proteínas de membrana, a ancoragem ao citoesqueleto e a sinalização celular em compartimentos subcelulares especializados.
Ankyrin G O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus ANK3 em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de ANK3. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função ANK3. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.
Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com ANK3 interrompido.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.