Plasmide CRISPR/Cas9 KO Ankyrin-1 (m): sc-419108
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Ankyrin-1 Le plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) est un ensemble de plasmides, chacun codant pour la nucléase Cas9 et un ARN guide (gRNA) de 20 nt spécifique à la cible, conçu pour une efficacité de knockout maximale à l'aide de séquences issues de la bibliothèque GeCKO v2
- Les séquences d'ARN guide (gRNA) dirigent Cas9 pour induire des cassures double brin (DSB) spécifiques au site dans le locus génomique Ankyrin-1, entraînant un knock-out génique par jonction non homologue (NHEJ)
- Les gènes de résistance à la puromycine et RFP sont flanqués de sites LoxP, permettant la suppression des marqueurs de sélection via la recombinase Cre (Cre Vector : sc-418923) après l'établissement de lignées cellulaires knock-out stables
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: Ankyrin-1 Antibody (8C3): sc-12733
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide CRISPR/Cas9 KO Ankyrin-1 (m) | sc-419108 | 20 µg | $397.00 |
Présentation
Ank1 code l’ankyrine-1, un adaptateur membranaire qui relie des protéines membranaires intégrales au cytosquelette sous-jacent spectrine–actine, contribuant à la stabilité mécanique des cellules et à l’organisation des domaines membranaires. Dans les cellules érythroïdes murines, l’ankyrine-1 est un composant clé du squelette membranaire des globules rouges, coordonnant les interactions entre la bande 3, la spectrine et des complexes associés qui influencent la déformabilité membranaire et l’homéostasie ionique. La perturbation d’Ank1 affecte l’ancrage du cytosquelette et peut modifier la morphologie des hématies, offrant un modèle pratique pour étudier des phénotypes de type anémie hémolytique ainsi que des principes plus généraux du couplage membrane–cytosquelette. La fonction de l’ankyrine-1 est également pertinente pour l’étude du trafic des protéines et de la signalisation compartimentée à la membrane plasmique.
Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Ankyrin-1 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Ank1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Ank1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.
La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Ank1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Ankyrin-1.
Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Ank1 pour l'étude de la signalisation de Ankyrin-1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.
Caractéristiques principales
- sgRNA ciblant le ou les exons de Ank1 essentiels à la fonction de Ankyrin-1
Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Ank1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
Compatible avec l'administration par transfection
Variantes de conception
CRISPR +/- HDR
- Les gRNA codés par le Ankyrin-1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le Ankyrin-1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Ank1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Les constructions donneuses HDR codées par le Ankyrin-1 plasmide HDR (m) et le Ankyrin-1 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Ank1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Ank1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.