ANKRD22 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-416874-ACT

ANKRD22 (Ankyrin-Repeat-Domänen-enthaltendes Protein 22) ist ein menschliches Ankyrin-Repeat-Protein, das an Protein-Protein-Interaktionsnetzwerken beteiligt ist, welche zelluläre Signalwege und die transkriptionelle Regulation mitgestalten. Obwohl seine mechanistischen Funktionen bislang nicht vollständig geklärt sind, wurde die Expression von ANKRD22 mit kontextabhängigen Veränderungen der Zellproliferation, der metabolischen Anpassung und von Stressantwort-Programmen in Verbindung gebracht. Transkriptomische Studien berichten über veränderte ANKRD22-Spiegel in mehreren Krebsarten, was die Untersuchung seines Beitrags zu onkogenen Signalwegen, zur Anpassung an das Tumormikromilieu und zu biomarkerassoziierten Phänotypen unterstützt. Als potenzieller regulatorischer Knotenpunkt ist ANKRD22 interessant, um das Zusammenspiel von Signalwegen zu analysieren, die Wachstumskontrolle und zelluläre Homöostase beeinflussen.

ANKRD22 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen ANKRD22-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

ANKRD22 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des ANKRD22-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der ANKRD22-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen ANKRD22-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native ANKRD22-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von ANKRD22-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des ANKRD22-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem ANKRD22-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.