Plasmide CRISPR/Cas9 KO AMPKβ2 (h): sc-403537

Présentation

PRKAB2 code la sous-unité régulatrice β2 de la protéine kinase activée par l’AMP (AMPK), une sérine/thréonine kinase hétérotrimérique qui détecte l’état énergétique cellulaire via les rapports AMP/ADP sur ATP. AMPKβ2 contribue à l’assemblage et à la localisation du complexe et relie l’activation en amont à des cascades de phosphorylation qui freinent les programmes anaboliques tout en favorisant les voies cataboliques, notamment l’absorption du glucose, l’oxydation des acides gras et l’autophagie, via des interactions avec mTOR et d’autres réseaux de détection des nutriments. Par ces fonctions, AMPKβ2 est pertinente pour l’étude de l’adaptation au stress métabolique, de l’homéostasie mitochondriale et du contrôle de la croissance cellulaire. Des altérations de la signalisation AMPK ont été associées à des troubles métaboliques et à la biologie des cancers, faisant de PRKAB2 un nœud utile pour explorer la régulation, dépendante de l’énergie, des voies de prolifération et de survie.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO AMPKβ2 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène PRKAB2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du PRKAB2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert PRKAB2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine AMPKβ2.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en PRKAB2 pour l'étude de la signalisation de AMPKβ2, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de PRKAB2 essentiels à la fonction de AMPKβ2
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de PRKAB2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le AMPKβ2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le AMPKβ2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus PRKAB2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le AMPKβ2 plasmide HDR (h) et le AMPKβ2 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie PRKAB2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles PRKAB2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.