amphiregulin CRISPR Activation Plasmid (m): sc-419185-ACT

Das Mausgen **Areg** kodiert **Amphiregulin**, einen Liganden der Epidermal-Growth-Factor-(EGF)-Familie, der vorwiegend über **EGFR/ERBB-Rezeptoren** signalisiert und dadurch die Signalwege **MAPK/ERK**, **PI3K–AKT** und **JAK/STAT** aktiviert. Amphiregulin reguliert die Proliferation und Differenzierung von Epithelzellen, die Gewebereparatur sowie den Crosstalk zwischen Stroma und Immunsystem; seine Expression ist in zahlreichen Zelltypen induzierbar, darunter Epithelzellen sowie aktivierte myeloide Zellen und T‑Zell-Subsets. Eine fehlregulierte Amphiregulin–EGFR-Signalisierung wurde mit dysregulierter Entzündung, fibrotischem Umbau und Programmen der tumorassoziierten Mikroumgebung in Verbindung gebracht, wodurch **Areg** ein nützlicher Knotenpunkt für Signalweg- und Phänotypstudien ist. In Mausmodellen werden die Dynamiken der **Areg**-Expression häufig untersucht, um die Stärke der EGFR-Signalisierung mit Barrierefunktion, Wundantworten und immunvermitteltem Gewebeumbau zu verknüpfen.

amphiregulin Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen Areg-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

amphiregulin Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des Areg-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der Areg-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen amphiregulin-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native Areg-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von amphiregulin-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des amphiregulin-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem Areg-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.