Plasmide Double Nickase (h) AMBRA1: sc-404108-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) AMBRA1 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide AMBRA1 Double Nickase (h) et le plasmide AMBRA1 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant AMBRA1. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: AMBRA1 Antibody (G-6): sc-398204
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) AMBRA1 | sc-404108-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) AMBRA1 | sc-404108-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
AMBRA1 (régulateur 1 de l’autophagie et de beclin 1) code une protéine d’échafaudage qui coordonne l’initiation de l’autophagie en modulant le complexe BECLIN1/PIK3C3 et en intégrant des signaux issus des voies liées aux nutriments et au stress. AMBRA1 interagit également avec la protéostasie dépendante de l’ubiquitine et le contrôle du cycle cellulaire, contribuant à l’homéostasie cellulaire via la régulation du contrôle qualité mitochondrial et de la signalisation associée à l’apoptose. La dérégulation des réseaux d’autophagie liés à AMBRA1 a été associée à des altérations du développement neuronal et à des processus pertinents pour la tumorigenèse, ce qui en fait un nœud utile pour étudier l’adaptation au stress et le déséquilibre de la protéostasie dans les cellules humaines. En tant que régulateur de l’autophagie doté d’une connectivité étendue entre voies, AMBRA1 est fréquemment étudiée dans des modèles de neurobiologie, de métabolisme et de signalisation des cellules cancéreuses.
AMBRA1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus AMBRA1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de AMBRA1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de AMBRA1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de AMBRA1.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.