alpha Synuclein CRISPR Activation Plasmid (h): sc-417273-ACT

SNCA kodiert das menschliche Alpha-Synuclein, ein präsynaptisches Protein, das an der Synapsenvesikel-Trafficking, der Neurotransmitterfreisetzung und der Regulation der Membrankrümmung durch Lipidbindung beteiligt ist. Es interagiert mit der Vesikelrecycling-Maschinerie und beeinflusst Proteostase-Mechanismen, darunter das Ubiquitin-Proteasom- sowie das Autophagie-Lysosom-System, die den Proteinumsatz und die Aggregation steuern. Eine fehlregulierte SNCA-Expression oder Fehlfaltung wird mit erhöhter neuronaler Vulnerabilität in Verbindung gebracht und ist im Kontext der Lewy-Körper-Pathologie sowie Parkinson-assoziierter Mechanismen umfassend untersucht worden. Als Modulator der synaptischen Homöostase und des intrazellulären Transports wird SNCA in Zellmodellen häufig eingesetzt, um Stressantworten, mitochondriale Dysfunktion und neuroinflammatorische Signalwege zu untersuchen.

alpha Synuclein Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen SNCA-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

alpha Synuclein Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des SNCA-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der SNCA-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen alpha Synuclein-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native SNCA-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von alpha Synuclein-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des alpha Synuclein-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem SNCA-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.