Plásmido CRISPR de Activación (h) ALMS1: sc-407355-ACT

ALMS1 codifica una proteína grande asociada al centrosoma y al cuerpo basal que se localiza en los cilios primarios y es necesaria para la ciliogénesis, el tráfico ciliar y el mantenimiento de la organización de los microtúbulos. A través de su función en la señalización dependiente de cilios, ALMS1 influye en vías como Hedgehog y otros programas de transducción sensorial que coordinan el control del ciclo celular, la polaridad y la homeostasis tisular. La alteración de la función de ALMS1 se asocia con fenotipos de ciliopatía, incluido el síndrome de Alström, y se estudia ampliamente en el contexto de la desregulación metabólica, la degeneración retiniana, la miocardiopatía y la disfunción renal. Por ello, modular la expresión de ALMS1 resulta útil para analizar la biología de los cilios, el transporte intracelular y las redes de señalización que subyacen a mecanismos de enfermedad multisistémicos.

ALMS1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de ALMS1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

ALMS1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus ALMS1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional ALMS1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de ALMS1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo ALMS1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de ALMS1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía ALMS1 en células tumorales con expresión de ALMS1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.