Aldolase C CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-419083

概要

Aldoc は、解糖系酵素であるアルドラーゼCをコードしており、フルクトース-1,6-ビスリン酸をトリオースリン酸へ可逆的に開裂する反応を触媒します。これにより、グルコース利用が下流のATP産生および生合成系のフラックスと結び付けられます。マウス組織では、ALDOCは中枢神経系で高発現しており、ニューロンおよびグリアにおける代謝の区画化に寄与して、神経伝達やレドックスバランスなどの過程を支えます。さらに解糖系以外にも、アルドラーゼファミリーのメンバーは、代謝と細胞骨格（細胞構造）を結び付けるタンパク質間相互作用を介して、細胞骨格の構築やシグナル伝達に影響を与えることがあります。ALDOCの発現変化は、神経生物学において代謝状態や細胞同一性のマーカーとして用いられており、解糖系プログラムの破綻は神経変性、虚血ストレス応答、ならびに増殖性疾患モデルに広く関連します。

Aldolase C CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるAldoc遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Aldoc内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Aldocのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Aldolase Cタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Aldolase Cシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Aldoc欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Aldolase Cの機能に不可欠なAldocエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Aldocゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Aldolase C CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびAldolase C CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Aldoc遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Aldolase C HDRプラスミド（m）および Aldolase C HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはAldocホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のAldoc標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。