Aldolase A Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-419082

Descripción general

Aldoa codifica la aldolasa A, una enzima glucolítica que cataliza la escisión reversible de la fructosa-1,6-bisfosfato en gliceraldehído-3-fosfato y fosfato de dihidroxiacetona, vinculando la utilización de la glucosa con la producción de ATP y la generación de precursores biosintéticos. En células de ratón, la aldolasa A sostiene el flujo metabólico a través de la glucólisis y se integra con programas más amplios del metabolismo del carbono que influyen en el equilibrio redox y la proliferación celular. Más allá del metabolismo, se ha implicado a la aldolasa A en la organización del citoesqueleto mediante interacciones con la dinámica de la actina, conectando la producción de energía con la forma celular y la motilidad. La expresión alterada de ALDOA y la reprogramación glucolítica se estudian con frecuencia en contextos de estrés metabólico y fenotipos asociados a enfermedad, incluida la adaptación metabólica asociada a tumores y déficits funcionales relacionados con el músculo.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO Aldolase A (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Aldoa en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Aldoa junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Aldoa tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Aldolase A.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Aldoa para la investigación de la señalización de Aldolase A, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Aldoa críticos para la función de Aldolase A
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Aldoa para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido Aldolase A CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido Aldolase A CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Aldoa. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Aldolase A (m) y el plásmido HDR Aldolase A (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Aldoa para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Aldoa definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.