Plásmido CRISPR de Activación (h) Aldehyde dehydrogenase 2/ALDH2: sc-400809-ACT

El gen humano **ALDH2** codifica la aldehído deshidrogenasa mitocondrial 2, una enzima dependiente de NAD(P)+ que oxida aldehídos reactivos como el acetaldehído y aldehídos derivados de la peroxidación lipídica (por ejemplo, 4-hidroxinonenal) a sus ácidos correspondientes. Al limitar la formación de aductos de aldehídos en proteínas, lípidos y ADN, ALDH2 contribuye a la homeostasis redox mitocondrial, a la proteostasis y a las respuestas celulares al estrés vinculadas a vías de desintoxicación de ROS. La actividad de ALDH2 está estrechamente relacionada con el metabolismo del etanol y con la depuración más amplia de aldehídos en contextos cardiometabólicos y neurobiológicos, donde una función deteriorada puede agravar la señalización del daño oxidativo. La variación genética o la reducción de la función de ALDH2 se ha asociado con una susceptibilidad alterada a fenotipos relacionados con el alcohol y con procesos relevantes para la enfermedad que implican disfunción mitocondrial e inflamación.

Aldehyde dehydrogenase 2/ALDH2 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de ALDH2 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Aldehyde dehydrogenase 2/ALDH2 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus ALDH2 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional ALDH2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Aldehyde dehydrogenase 2/ALDH2. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo ALDH2 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Aldehyde dehydrogenase 2/ALDH2 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Aldehyde dehydrogenase 2/ALDH2 en células tumorales con expresión de ALDH2 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.