Plasmide Double Nickase (m) ALCAM: sc-419076-NIC
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (m) ALCAM correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide ALCAM Double Nickase (m) et le plasmide ALCAM Double Nickase (m2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant Alcam. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: ALCAM Antibody (B-6): sc-74558
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (m) ALCAM | sc-419076-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (m2) ALCAM | sc-419076-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Alcam code la molécule d’adhérence des leucocytes activés (ALCAM/CD166), un récepteur d’adhérence de la superfamille des immunoglobulines qui permet des interactions homophiles et hétérophiles à la surface cellulaire. Dans les tissus murins, ALCAM contribue à la stabilisation des contacts cellule–cellule, à l’organisation épithéliale et endothéliale, ainsi qu’à l’orientation des cellules en migration, en reliant les complexes d’adhérence membranaires aux programmes de remodelage du cytosquelette. L’adhérence médiée par ALCAM recoupe des processus tels que le trafic des cellules immunitaires, la croissance des neurites et le maintien des niches de cellules souches/progénitrices, où des modifications de la dynamique d’adhérence peuvent infléchir la différenciation et l’architecture tissulaire. Une expression ou une localisation dysrégulée d’ALCAM a été associée, dans des modèles de cancer, à des changements de l’invasion et du potentiel métastatique, ainsi qu’à des microenvironnements inflammatoires, faisant d’Alcam un nœud utile pour étudier la signalisation dépendante de l’adhérence et le remodelage tissulaire.
ALCAM Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Alcam dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Alcam. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Alcam. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Alcam.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.