Plásmido CRISPR de Activación (h) ALB/Albumin: sc-400269-ACT

ALB codifica la albúmina, la proteína plasmática más abundante sintetizada por los hepatocitos y secretada a la circulación, donde mantiene la presión osmótica coloide y actúa como un importante transportador de ácidos grasos, bilirrubina, hormonas y muchas moléculas pequeñas. La albúmina participa en el transporte sistémico de nutrientes y metabolitos, influye en el equilibrio redox mediante el amortiguamiento de tioles basado en cisteína y contribuye a la disponibilidad extracelular de ligandos que puede modular la señalización metabólica hepática. La expresión de ALB está estrechamente acoplada a los programas de diferenciación de los hepatocitos y a las redes de transcripción específicas del hígado, por lo que se usa ampliamente como marcador de identidad y función hepáticas. Los niveles alterados de albúmina y la transcripción desregulada de ALB se asocian comúnmente con disfunción hepática y se monitorizan con frecuencia en estudios sobre lesión hepática, fibrosis y mecanismos de enfermedad metabólica.

ALB/Albumin El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de ALB sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

ALB/Albumin El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus ALB en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional ALB, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de ALB/Albumin. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo ALB y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de ALB/Albumin en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía ALB/Albumin en células tumorales con expresión de ALB silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.