Plasmide Double Nickase (h) AlaRS: sc-404252-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) AlaRS correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide AlaRS Double Nickase (h) et le plasmide AlaRS Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant AARS. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: AlaRS Antibody (A-6): sc-165990
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) AlaRS | sc-404252-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) AlaRS | sc-404252-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
AARS code l’alanyl‑ARNt synthétase humaine (AlaRS), une aminoacyl‑ARNt synthétase cytosolique qui lie l’alanine à son ARNt cognat, garantissant un décodage fidèle lors de la traduction. En maintenant la fidélité du chargement des ARNt, AlaRS soutient la protéostasie globale et s’articule avec les réponses cellulaires au stress qui surveillent le contrôle qualité de la traduction. Une perturbation de l’activité des aminoacyl‑ARNt synthétases peut déséquilibrer l’homéostasie de la synthèse protéique et a été associée à des phénotypes neurodéveloppementaux et neurodégénératifs, faisant d’AARS un nœud pertinent pour étudier comment les voies liées à la traduction influencent la fitness cellulaire. La fonction d’AARS est également pertinente pour l’étude de la biologie des ARNt, de la dynamique des ribosomes et des modifications de signalisation en aval déclenchées par une aminoacylation altérée.
AlaRS Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus AARS dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de AARS. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de AARS. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de AARS.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.