Plásmido Doble Nickase (m) Akt2: sc-419072-NIC
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (m)Akt2 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa Akt2 (m) y el plásmido de doble nickasa Akt2 (m2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a Akt2. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: Akt2 Anticuerpo (1G8C12): sc-81148
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (m) Akt2 | sc-419072-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (m2) Akt2 | sc-419072-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Akt2 codifica la quinasa de serina/treonina AKT2, un efector central de la señalización de PI3K que conecta las señales provenientes de factores de crecimiento y del receptor de insulina con el control aguas abajo de la captación de glucosa, la síntesis de glucógeno, el metabolismo lipídico y la supervivencia celular. En tejidos de ratón, la actividad de AKT2 influye en el tráfico de membrana de los transportadores de glucosa, en programas anabólicos regulados por mTORC1 y en la inhibición dependiente de fosforilación de factores proapoptóticos como los factores de transcripción de la familia FOXO. La desregulación de la señalización de AKT2 se asocia con alteraciones en la sensibilidad a la insulina y en la homeostasis metabólica, y la activación aberrante de esta vía se examina con frecuencia en modelos de proliferación, respuestas al estrés y señalización oncogénica. Como nodo que integra señales de receptores tirosina quinasa con la circuitería metabólica y del ciclo celular, Akt2 se estudia ampliamente en adipocitos, hepatocitos, miocitos y en diversos contextos de células cancerosas.
Akt2 El plásmido de doble nicasa (m) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus Akt2 en líneas celulares mouse. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de Akt2. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de Akt2. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con Akt2 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.