AKR1B10 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403649-ACT

AKR1B10 codifica uma aldo-ceto redutase humana dependente de NADPH que reduz carbonilas reativas e aldeídos derivados da peroxidação lipídica, contribuindo para a homeostase redox celular e para a desintoxicação. Ao modular o metabolismo de retinoides e lipídios e amortecer o estresse oxidativo, o AKR1B10 influencia programas de proliferação, diferenciação e sinalização inflamatória. A expressão desregulada de AKR1B10 foi relatada em múltiplos contextos tumorais e em estados associados a estresse metabólico e oxidativo, nos quais alterações no processamento de carbonilas podem remodelar a aptidão celular. Como resultado, o AKR1B10 é frequentemente estudado como um nó que conecta a resposta a xenobióticos, o remodelamento lipídico e vias de adaptação ao estresse.

AKR1B10 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de AKR1B10 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

AKR1B10 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus AKR1B10 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição AKR1B10, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de AKR1B10. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus AKR1B10 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de AKR1B10 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via AKR1B10 em células tumorais com expressão de AKR1B10 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.