Plásmido CRISPR de Activación (h) AKAP 9: sc-405430-ACT

AKAP9 codifica la proteína de anclaje de la proteína quinasa A 9 (AKAP9), un gran andamiaje que organiza espacialmente la PKA y otras enzimas de señalización adicionales en compartimentos subcelulares específicos. Se localiza en los centrosomas y en el aparato de Golgi, donde favorece la nucleación de microtúbulos, el ensamblaje del huso mitótico y el mantenimiento de la polaridad celular, influyendo así en la progresión del ciclo celular y en el tráfico intracelular. Mediante el anclaje de la señalización de AMPc/PKA y la coordinación de complejos proteicos implicados en la dinámica del citoesqueleto, AKAP9 contribuye a eventos de fosforilación regulados durante la mitosis y la migración. La alteración de la expresión de AKAP9 o sus variaciones estructurales se han vinculado con una señalización proliferativa desregulada y la inestabilidad cromosómica en biología del cáncer, y también se ha estudiado en el contexto de fenotipos del neurodesarrollo y cardíacos.

AKAP 9 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de AKAP9 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

AKAP 9 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus AKAP9 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional AKAP9, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de AKAP 9. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo AKAP9 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de AKAP 9 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía AKAP 9 en células tumorales con expresión de AKAP9 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.