Plasmide CRISPR d'Activation (h) AKAP 8L: sc-406003-ACT

AKAP8L (A-kinase anchoring protein 8-like) code une protéine nucléaire d’ancrage de l’A-kinase qui organise spatialement la signalisation cAMP/PKA en arrimant l’activité kinase à des compartiments subnucléaires définis. Grâce à des interactions d’échafaudage, AKAP8L est associée à la régulation de processus liés à la chromatine, au métabolisme de l’ARN et à l’architecture nucléaire dépendante du cycle cellulaire, en coordonnant les événements de phosphorylation avec les programmes transcriptionnels. Une expression altérée ou une dépendance à AKAP8L a été rapportée dans des contextes de cancer et de réponse au stress, où le remaniement des réseaux d’ancrage des kinases peut influencer la prolifération et la régulation du génome. En tant qu’échafaudage de signalisation nucléaire, AKAP8L est fréquemment étudiée pour son rôle dans l’intégration de la signalisation PKA avec le contrôle transcriptionnel et les voies de maturation/traitement de l’ARN.

AKAP 8L Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de AKAP8L sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

AKAP 8L Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus AKAP8L dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription AKAP8L, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de AKAP 8L. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus AKAP8L natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de AKAP 8L au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie AKAP 8L dans les cellules tumorales présentant une expression de AKAP8L silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.