Plásmido Doble Nickase (h) AKAP 12: sc-406008-NIC

AKAP12 codifica la proteína de anclaje de la A-quinasa 12 (AKAP12), una proteína de andamiaje que organiza espacialmente a PKA, PKC y fosfatasas para coordinar la señalización compartimentalizada en la membrana plasmática y el citoesqueleto. Al integrar señales de vías impulsadas por GPCR y por factores de crecimiento, AKAP12 influye en la forma celular, la motilidad, la dinámica de adhesión y la remodelación del citoesqueleto mediante la regulación de procesos asociados a la actina. La alteración de la expresión de AKAP12 o del contexto de señalización se ha vinculado con programas desregulados de migración y proliferación relevantes para la biología del cáncer y para respuestas vasculares e inflamatorias. Estas propiedades hacen de AKAP12 un objetivo útil para estudiar cómo la señalización de quinasas ancladas gobierna la función de barrera, las respuestas al estrés y los fenotipos dependientes del microambiente.

AKAP 12 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus AKAP12 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de AKAP12. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de AKAP12. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con AKAP12 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.