Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
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AIP2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-417914
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- AIP2 Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
- Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico AIP2, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
- I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: AIP2 Antibody (A-3): sc-398090
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
AIP2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h) | sc-417914 | 20 µg | $397.00 |
Panoramica
WWP2 codifica per l’E3 ubiquitina-proteina ligasi AIP2, una ligasi dell’ubiquitina con dominio HECT che catalizza il trasferimento di ubiquitina per regolare la stabilità delle proteine e l’output dei segnali. AIP2 partecipa al controllo ubiquitina-dipendente di processi cellulari chiave, tra cui la proteostasi, il turnover di recettori e fattori di trascrizione e la modulazione fine delle vie di segnalazione in contesti quali il signaling TGF-β/SMAD e reti regolatorie correlate. Attraverso queste funzioni, WWP2 contribuisce a modulare la crescita cellulare, la differenziazione e i programmi di transizione epitelio–mesenchimale. Una ubiquitinazione deregolata che coinvolge WWP2 è stata associata a stati di segnalazione alterati osservati in molteplici modelli rilevanti per la malattia, a supporto del suo impiego come nodo meccanicistico negli studi sugli squilibri di via.
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO AIP2 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene WWP2 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del WWP2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto WWP2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina AIP2.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di WWP2 per lo studio della segnalazione di AIP2, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
Caratteristiche principali
- sgRNA mirati agli esoni WWP2 critici per la funzione di AIP2
Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di WWP2 per migliorare l'efficienza del knockout
Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione
Varianti di progettazione
CRISPR +/- HDR
- Gli gRNA codificati dal AIP2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal AIP2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus WWP2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
I costrutti donatori HDR codificati dal AIP2 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR AIP2 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia WWP2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio WWP2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.