Plásmido Doble Nickase (h) Agmatinase: sc-405176-NIC

AGMAT codifica la agmatinasa, una metaloenzima dependiente de manganeso que hidroliza la agmatina para producir putrescina y urea, conectando el metabolismo de la agmatina derivada de la arginina con la red biosintética de poliaminas. Al regular la disponibilidad de putrescina, la agmatinasa influye en los niveles posteriores de espermidina y espermina, que favorecen el empaquetamiento de ácidos nucleicos, el control de la traducción y la progresión del ciclo celular. La actividad de AGMAT se cruza con el flujo de arginina relacionado con el óxido nítrico y con las respuestas al estrés celular al modular la agmatina, una amina bioactiva con funciones neuromoduladoras y de señalización metabólica. La desregulación de la homeostasis de poliaminas y las alteraciones del metabolismo agmatina/arginina se han asociado con la biología del cáncer, la neurobiología y fenotipos inflamatorios, lo que convierte a AGMAT en una diana útil para estudios mecanísticos de reprogramación metabólica.

Agmatinase El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus AGMAT en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de AGMAT. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de AGMAT. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con AGMAT alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.