aggrecan CRISPR/Cas9 케이오 플라스미드 (h): sc-400760

개요

ACAN은 아그리칸(aggrecan)을 암호화하며, 아그리칸은 히알루로난과 링크 단백질에 결합해 연골 세포외기질의 수화된 골격(backbone)을 형성하는 대형 콘드로이틴 황산 프로테오글리칸입니다. 이를 통해 압축 하중에 대한 저항성이 가능해집니다. 아그리칸의 턴오버는 연골세포의 동화작용(anabolic) 프로그램과, ADAMTS 계열 아그리칸분해효소(aggrecanase)에 의한 절단을 포함한 세포외 단백질분해 및 기질 리모델링 경로에 의해 조절되며, 이러한 과정은 조직의 생체역학적 특성을 형성합니다. ACAN 발현 또는 아그리칸 처리 과정의 교란은 연골 항상성을 무너뜨리며 퇴행성 및 발생·발달성 골격 표현형과 연관되기 때문에, 세포외기질 조직화와 기계생물학을 연구하는 데 중요한 핵심 노드로 간주됩니다. 따라서 ACAN은 연골세포 분화, 성장판 생물학, 연골 기질 조립 연구에서 널리 사용되는 마커이자 기능적 결정인자입니다.

aggrecan CRISPR/Cas9 KO 플라스미드 (h)는 human 세포주에서 ACAN 유전자의 표적 파괴를 위해 설계된 플라스미드 풀입니다. 각 플라스미드는 ACAN 유전자 내의 서로 다른 부위를 표적으로 하는 고유한 단일 가이드 RNA(sgRNA)와 Streptococcus pyogenes Cas9 뉴클레아제를 함께 발현합니다. 또한 이 플라스미드들은 GFP를 암호화하여, 형광 현미경이나 유세포 분석기를 통해 성공적으로 형질전환된 세포를 형광으로 식별하고 농축할 수 있게 합니다.

다중 가이드 설계는 Cas9에 의한 이중 가닥 절단 형성 후 ACAN의 개방 독서 틀(ORF)을 파괴하는 삽입 또는 결실(indel)이 발생할 가능성을 높입니다. CRISPR/Cas9 시스템에 의해 유발된 DNA 절단은 내인성 비동종 말단 결합(NHEJ) 경로를 통해 복구되며, 이는 종종 aggrecan 단백질 발현을 소멸시키는 프레임 시프트 돌연변이를 초래합니다.

이 CRISPR 녹아웃 시스템은 aggrecan 신호 전달 연구, 기능 유전체학 연구, 암 생물학 연구 및 인간 세포주에서의 치료 반응 평가를 위한 ACAN 결핍 세포 모델을 효율적으로 생성할 수 있게 합니다.

주요 특징

• aggrecan 기능에 중요한 ACAN 엑손을 표적하는 sgRNA
  전달을 단순화하기 위해 단일 플라스미드에서 SpCas9 및 sgRNA의 공동 발현
  형질전환된 세포 식별을 위한 GFP 리포터
  녹아웃 효율 향상을 위해 여러 ACAN 게놈 부위를 표적하는 플라스미드 풀
  형질전환을 통한 전달과 호환

설계 변형

CRISPRs +/- HDR

• aggrecan CRISPR/Cas9 KO 플라스미드 (h) 및 aggrecan CRISPR/Cas9 KO 플라스미드 (h2)에 의해 암호화되는 gRNA는 ACAN 유전자좌 내의 서로 다른 부위를 표적화합니다. 표적화 설계 중 하나 또는 둘 다 이용 가능할 수 있습니다. 구입 가능 여부는 관련 제품을 참조하십시오.
  aggrecan HDR 플라스미드 (h) 및 aggrecan HDR 플라스미드 (h2)에 의해 암호화되는
  HDR 기증자 컨스트럭트는 푸로마이신 내성 카세트와 RFP 리포터를 포함하며, 이는 CRISPR/Cas9 KO 설계에 해당하는 정의된 ACAN 표적 부위에서의 상동성 유도 복구를 지원하기 위해 ACAN 상동성 암으로 둘러싸여 있습니다. HDR 기증자의 재고 여부는 달라질 수 있습니다. 재고 여부는 관련 제품을 참조하십시오.

연구용으로만 사용하세요. 진단 또는 치료용이 아닙니다.