Plasmide Double Nickase (h) AFX1: sc-402408-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) AFX1 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide AFX1 Double Nickase (h) et le plasmide AFX1 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant FOXO4. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: AFX1 Antibody (A-7): sc-373877
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) AFX1 | sc-402408-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) AFX1 | sc-402408-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
FOXO4 (AFX1) est un facteur de transcription de la famille Forkhead box O qui intègre la signalisation de l’insuline/IGF‑1, la dynamique de phosphorylation PI3K–AKT et des voies sensibles au stress afin de réguler des gènes contrôlant l’arrêt du cycle cellulaire, l’apoptose, la résistance au stress oxydatif et le métabolisme. Son activité est modulée par des modifications post‑traductionnelles qui influencent la navette nucléocytoplasmique et la liaison à l’ADN, façonnant ainsi des programmes transcriptionnels liés à l’homéostasie cellulaire. FOXO4 participe à des interactions entre réseaux de signalisation impliquant MAPK, AMPK et TGF‑β, et peut influencer l’accessibilité de la chromatine via le recrutement de cofacteurs. Une signalisation FOXO4 dérégulée a été associée à des altérations de la prolifération et de l’adaptation au stress dans le contexte de la biologie des cancers, ainsi qu’à la sénescence cellulaire et aux mécanismes de vieillissement des tissus.
AFX1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus FOXO4 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de FOXO4. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de FOXO4. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de FOXO4.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.