AFG3L2 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-404565

Descripción general

AFG3L2 codifica una metaloproteasa AAA+ de la membrana interna mitocondrial que se ensambla en el complejo proteasa m-AAA, apoyando el control de calidad proteica al extraer y degradar proteínas de membrana mal plegadas o no ensambladas. Mediante proteólisis regulada, AFG3L2 ayuda a mantener la integridad de la cadena respiratoria, la biogénesis de los ribosomas mitocondriales y la capacidad global de fosforilación oxidativa, influyendo así en el metabolismo energético celular y la proteostasis. La alteración de la función de AFG3L2 perturba la dinámica mitocondrial y puede desencadenar respuestas de estrés vinculadas a una bioenergética deficiente. Las variantes patogénicas en AFG3L2 se asocian con fenotipos neurodegenerativos, incluida la ataxia espinocerebelosa, lo que lo convierte en una diana útil para estudiar la disfunción mitocondrial en modelos neuronales.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO AFG3L2 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen AFG3L2 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del AFG3L2 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de AFG3L2 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína AFG3L2.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en AFG3L2 para la investigación de la señalización de AFG3L2, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de AFG3L2 críticos para la función de AFG3L2
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de AFG3L2 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido AFG3L2 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido AFG3L2 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus AFG3L2. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR AFG3L2 (h) y el plásmido HDR AFG3L2 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología AFG3L2 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana AFG3L2 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.