adseverin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-422815

Übersicht

Scin kodiert Adseverin, ein Ca²⁺-reguliertes, Aktin-filamentspaltendes und -kappendes Protein der Gelsolin-Superfamilie, das die Dynamik filamentösen Aktins in stimulusabhängiger Weise umgestaltet. Indem Adseverin den schnellen Abbau und die Reorganisation von Aktinfilamenten fördert, unterstützt es Prozesse wie Membrantransport, Veränderungen der Zellform und regulierte Sekretion, insbesondere in hämatopoetischen und sekretorischen Zellkontexten. Seine Aktivität steht in Wechselwirkung mit Kalziumsignalen und Signalwegen der Zytoskelettkontrolle, die Adhäsion, Migration und Vesikelexozytose beeinflussen. Fehlreguliertes Aktin-Remodelling und kalziumabhängige Sekretion sind häufig an entzündlichen und neoplastischen Phänotypen beteiligt, was Scin zu einem nützlichen Knotenpunkt für mechanistische Studien zur zytoskelettverknüpften Krankheitsbiologie in Mausmodellen macht.

Das adseverin CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Scin-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Scin-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Scin nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die adseverin-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Scin-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der adseverin-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Scin-Exone abzielen, die für die adseverin-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Scin-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom adseverin CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom adseverin CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Scin-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das adseverin HDR-Plasmid (m) und adseverin HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Scin-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Scin-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.