ADH5 Double Nickase Plasmid (m): sc-419007-NIC
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das ADH5 Double Nickase Plasmid (m) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- ADH5 Double-Nickase-Plasmid (m) und ADH5 Double-Nickase-Plasmid (m2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf Adh5 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
ADH5 Double Nickase Plasmid (m) | sc-419007-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
ADH5 Double Nickase Plasmid (m2) | sc-419007-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Das murine Gen *Adh5* kodiert die Alkoholdehydrogenase 5 (ADH5), eine weit verbreitet exprimierte zytosolische Dehydrogenase, die als S‑Nitrosoglutathion-Reduktase fungiert und die Bioaktivität von Stickstoffmonoxid (NO) reguliert, indem sie S‑Nitrosoglutathion sowie verwandte, formaldehydabgeleitete Addukte metabolisiert. Über die Kontrolle der Protein‑S‑Nitrosylierung und des Redoxgleichgewichts beeinflusst ADH5 Antworten auf oxidativen und nitrosativen Stress, den glutathionabhängigen Stoffwechsel sowie nachgeschaltete Signalwege, die die mitochondriale Funktion und entzündliche Programme betreffen. Störungen der ADH5‑Aktivität wurden mit veränderter Entgiftungskapazität und einer Dysregulation der NO‑Signalgebung in Verbindung gebracht, was Relevanz für Modelle von Leberschädigung, Immundysfunktion und neurodegenerativen Prozessen hat, in denen reaktive Carbonyl- und Stickstoffspezies akkumulieren. *Adh5* stellt daher ein gut handhabbares Ziel dar, um Netzwerke der Stressadaptation und die redoxsensitive Regulation der zellulären Homöostase in Mausmodellen zu untersuchen.
ADH5 Das Double-Nickase-Plasmid (m) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des Adh5-Lokus in mouse-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von Adh5 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die Adh5-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit Adh5-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.