Adenylate cyclase 3/AC3/ADCY3 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-400407-ACT

Das humane Gen **ADCY3** kodiert die Adenylatcyclase 3 (AC3), ein membranassoziiertes Enzym, das nachgeschaltet der GPCR-Signalübertragung ATP zu cAMP umsetzt. Durch die Steuerung von cAMP/PKA- sowie EPAC-abhängiger Signalgebung beeinflusst AC3 Transkriptionsprogramme, Ionenkanalaktivität und den Zellstoffwechsel und spielt dabei eine wichtige Rolle in chemosensorischen Signalwegen und der neuronalen Signalübertragung. Veränderte ADCY3-Expression oder -Funktion wurde mit metabolischen Phänotypen, einschließlich adipositasassoziierter Merkmale und einer gestörten Energiehomöostase, in Verbindung gebracht; zudem wird ADCY3 in Kontexten untersucht, in denen cAMP-Signalgebung Entzündung und endokrine Regulation beeinflusst. Als Knotenpunktregulator der Second-Messenger-Dynamik ist ADCY3 ein nützliches Ziel, um stimulusabhängige cAMP-Antworten und Crosstalk zwischen Signalwegen zu untersuchen.

Adenylate cyclase 3/AC3/ADCY3 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen ADCY3-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Adenylate cyclase 3/AC3/ADCY3 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des ADCY3-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der ADCY3-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Adenylate cyclase 3/AC3/ADCY3-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native ADCY3-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Adenylate cyclase 3/AC3/ADCY3-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Adenylate cyclase 3/AC3/ADCY3-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem ADCY3-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.