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Adducin α慢病毒激活颗粒(h) | sc-401693-LAC | 200 µl | $455.00 |
ADD1 编码加肌动蛋白 α(adducin α),这是一种膜细胞骨架蛋白,能够封端并束集肌动蛋白丝,并促进细胞皮质处谱蛋白–肌动蛋白网络的组装。通过调控肌动蛋白重塑、细胞形态以及膜稳定性,加肌动蛋白 α 影响细胞–细胞黏附、迁移和机械抗性等过程;其活性还可在包括 PKC 以及与 Rho 家族 GTP 酶相关的细胞骨架调控在内的信号通路中,通过磷酸化进行调节。在红系细胞和上皮细胞等背景下,ADD1 参与膜结构组织及与离子转运相关的支架搭建,将细胞骨架架构与细胞稳态联系起来。加肌动蛋白功能失调及细胞骨架重塑异常与多种涉及细胞力学与信号改变的复杂性状和疾病相关,因此 ADD1 是研究人类细胞中由细胞骨架驱动表型的一个有用关键节点。
Adducin α 慢病毒激活颗粒(h)通过将完整的协同激活介导体(SAM)转录激活系统包装到可直接转导的高滴度慢病毒颗粒中,满足了这一需求,从而能够在更广泛的人类细胞类型中高效上调 ADD1 表达。
Adducin α 慢病毒激活颗粒(h)通过慢病毒转导递送协同激活介导体(SAM)系统的所有功能组分。该系统包含三种共同转导至靶细胞的颗粒制剂:一种编码与VP64转激活域融合的无催化活性的dCas9(D10A和N863A突变),并携带布拉西定抗性基因; 一种编码MS2-p65-HSF1融合蛋白并携带潮霉素抗性基因的制剂;以及一种编码靶标特异性20 nt sgRNA(与两个MS2 RNA适配体融合)并携带嘌呤霉素抗性基因的制剂。经过慢病毒转导和表达盒的基因组整合后,SAM组分得以稳定表达,并在ADD1转录起始位点上游的近端启动子区域内的靶位点组装。在此处,VP64、p65和HSF1协同作用,招募内源性转录 machinery,从而驱动内源性Adducin α表达的持续上调。使用无核酸酶活性的 dCas9 可避免引入双链 DNA 断裂,并保留原生的 ADD1 基因组位点和调控架构。
慢病毒载体具有多项实用优势:稳定的基因组整合支持细胞分裂过程中的可遗传激活;高滴度颗粒制剂免去了内部病毒生产的需要;且与原代细胞、非增殖细胞及转染抗性细胞类型的兼容性,扩大了实验的可及性。可通过嘌呤霉素、潮霉素和布拉西定进行三重抗生素筛选,以确认并富集成功的转导。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。