Adducin α Lentiviral Ativação Partículas de ativação de lentivirus (h): sc-401693-LAC

ADD1 codifica a aducina α, uma proteína do citoesqueleto de membrana que “capa” e agrupa filamentos de actina e promove a montagem da rede espectrina–actina no córtex celular. Por meio da regulação do remodelamento da actina, da forma celular e da estabilidade da membrana, a aducina α influencia processos como adesão célula–célula, migração e resiliência mecânica, e sua atividade é modulada por fosforilação em vias de sinalização que incluem PKC e o controle do citoesqueleto ligado a GTPases da família Rho. Em contextos eritroides e epiteliais, ADD1 contribui para a organização da membrana e para arcabouços associados ao transporte de íons, conectando a arquitetura do citoesqueleto à homeostase celular. A desregulação da função da aducina e do remodelamento do citoesqueleto tem sido associada a características complexas e a distúrbios que envolvem mecânica celular e sinalização alteradas, tornando ADD1 um nó útil para estudar fenótipos conduzidos pelo citoesqueleto em células humanas.

As Partículas de Ativação Lentivirais Adducin α (h) respondem a esta necessidade ao encapsular o sistema completo de ativação transcricional do mediador de ativação sinérgica (SAM) em partículas lentivirais de alto título, prontas para transdução, permitindo uma regulação positiva eficiente de ADD1 numa gama mais ampla de tipos de células humanas.

As Partículas de Ativação Lentivirais Adducin α (h) fornecem todos os componentes funcionais do sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) através da transdução lentiviral. O sistema compreende três preparações de partículas co-transduzidas em células-alvo: uma que codifica dCas9 cataliticamente inativo (mutações D10A e N863A) fundido ao domínio de transativação VP64 com um gene de resistência à blasticidina; uma que codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1 com um gene de resistência à higromicina; e uma que codifica um sgRNA de 20 nt específico do alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 com um gene de resistência à puromicina. Após a transdução lentiviral e a integração genómica das cassetes de expressão, os componentes do SAM são expressos de forma estável e reúnem-se no locus-alvo dentro da região promotora proximal a montante do local de início da transcrição ADD1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam cooperativamente para recrutar a maquinaria transcricional endógena e impulsionar a regulação positiva sustentada da expressão endógena de Adducin α. A utilização de dCas9 inativo em termos de nuclease evita a introdução de quebras de DNA de cadeia dupla e preserva o locus genómico nativo ADD1 e a arquitetura reguladora.

O formato lentiviral oferece várias vantagens práticas: a integração genómica estável suporta a ativação hereditária ao longo das divisões celulares; as preparações de partículas de alto título eliminam a necessidade de produção viral interna; e a compatibilidade com tipos de células primárias, não divisíveis e resistentes à transfecção amplia a acessibilidade experimental. A transdução bem-sucedida pode ser confirmada e enriquecida através de seleção tripla com antibióticos utilizando puromicina, higromicina e blasticidina.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.