Plasmide Double Nickase (h) ADAT1: sc-411760-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) ADAT1 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide ADAT1 Double Nickase (h) et le plasmide ADAT1 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant ADAT1. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: ADAT1 Antibody (C-5): sc-271812
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) ADAT1 | sc-411760-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) ADAT1 | sc-411760-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ADAT1 code l’adénosine désaminase agissant sur l’ARNt 1, une enzyme d’édition de l’ARN qui catalyse la désamination de l’adénosine en inosine à la position wobble de certains ARNt, influençant ainsi la reconnaissance des codons et la fidélité de la traduction. Cette modification post‑transcriptionnelle contribue au contrôle qualité des ARNt et à la protéostasie, reliant l’activité d’ADAT1 à des voies plus larges du métabolisme de l’ARN et de la réponse au stress. Une altération de l’édition des ARNt peut perturber la synthèse protéique et l’homéostasie cellulaire, et ADAT1 a été étudié dans le contexte de phénotypes neurodéveloppementaux et d’autres troubles associés à des défauts du traitement de l’ARN et de la traduction.
ADAT1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus ADAT1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de ADAT1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de ADAT1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de ADAT1.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.