ADAR3 Double Nickaseプラスミド (h): sc-402742-NIC

ADARB2 は ADAR3 をコードしており、ADAR3 は二本鎖 RNA（dsRNA）に結合する「RNA に作用するアデノシン脱アミノ化酵素（ADAR）」ファミリーの中でも脳で高発現するメンバーで、RNA 構造の調節や転写後の遺伝子制御に関与すると考えられています。触媒活性をもつ ADAR1/ADAR2 とは異なり、ADAR3 はしばしば編集活性を欠く（editing-inactive）と説明されますが、dsRNA 基質をめぐって競合することで A-to-I RNA 編集の結果を調節し、編集依存的な転写産物のリコーディング、スプライシング、RNA の安定性、miRNA のプロセシングに影響を与えうるとされています。これらの機構を介して、ADAR3 は神経発生、シナプスシグナル伝達プログラム、ならびに内在性 dsRNA に応答する自然免疫の RNA センシング経路と交差します。ADARB2 の発現変化は、神経発達・神経精神系の表現型や、神経疾患の文脈で観察される RNA 編集シグネチャの破綻と関連づけて報告されています。

ADAR3 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における ADARB2 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、ADARB2内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、ADARB2の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、ADARB2が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。