Plasmide CRISPR/Cas9 KO ADAMTS-16 (h): sc-406511

Présentation

ADAMTS16 code pour ADAMTS-16, une métalloprotéinase sécrétée dépendante du zinc de la famille ADAMTS, qui remodèle par protéolyse des composants de la matrice extracellulaire (MEC) et régule l’architecture tissulaire. En modulant l’activité protéasique dans l’espace péricellulaire, ADAMTS-16 influence le renouvellement de la MEC, la signalisation cellule–matrice et les signaux du microenvironnement qui affectent les programmes d’adhésion, de migration et de différenciation. Des altérations de l’expression ou de l’activité d’ADAMTS16 ont été étudiées dans des contextes où le remodelage matriciel est dysrégulé, notamment en physiologie cardiovasculaire et rénale, en biologie de la reproduction et dans le remodelage stromal associé aux tumeurs. En tant que protéase associée à la matrice, ADAMTS-16 est souvent étudiée en parallèle de voies liées à l’organisation de la MEC, à la protéolyse et à la signalisation à l’interface tissulaire.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO ADAMTS-16 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène ADAMTS16 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du ADAMTS16, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert ADAMTS16 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine ADAMTS-16.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en ADAMTS16 pour l'étude de la signalisation de ADAMTS-16, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de ADAMTS16 essentiels à la fonction de ADAMTS-16
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de ADAMTS16 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le ADAMTS-16 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le ADAMTS-16 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus ADAMTS16. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le ADAMTS-16 plasmide HDR (h) et le ADAMTS-16 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie ADAMTS16 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles ADAMTS16 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.