ADAM9 Lentiviral Activation Particles (h): sc-403665-LAC

ADAM9 kodiert eine transmembrane Metalloprotease-Disintegrin, die das Ectodomain-Shedding verschiedener Zelloberflächenproteine vermittelt und damit den Umbau der extrazellulären Matrix, die Zell-Zell-Adhäsion sowie die Verfügbarkeit von Rezeptoren und Liganden beeinflusst. Durch die proteolytische Prozessierung von Substraten, die an der Wachstumsfaktor- und Zytokinsignalübertragung beteiligt sind, kann ADAM9 Signalwege modulieren, die mit epithelial-mesenchymalen Dynamiken, Migration und entzündlichen Antworten verknüpft sind. Seine Aktivität überschneidet sich mit integrinabhängiger Adhäsion und Metalloprotease-Netzwerken, die den Umsatz membranständiger Proteine und die perizelluläre Proteolyse regulieren. Eine fehlregulierte ADAM9-Expression oder -Aktivität wurde mit Tumorinvasion, fibroseassoziiertem Remodeling und neuroinflammatorischen Prozessen in Verbindung gebracht, wodurch ADAM9 ein nützliches Ziel für mechanistische Studien zur proteasegetriebenen Signalübertragung ist.

ADAM9 Lentivirale Aktivierungspartikel (h) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente ADAM9-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

ADAM9 Lentivirale Aktivierungspartikel (h) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der ADAM9-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen ADAM9-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen ADAM9-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.